一、简介 亚洲色图 自拍偷拍

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  单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）简称单增李斯特氏菌，是一种东说念主畜共患病的病原菌。它能引起东说念主畜的李氏菌的病，感染后主要发达为败血症、脑膜炎和单核细胞增加。它正常存在于当然界中，食物中存在的单增李氏菌对东说念主类的安全具有危急，该菌在4℃的环境中仍可滋长繁衍，是冷藏食物威迫东说念主类健康的主要病原菌之一，因此，在食物卫生微生物测验中，必须加以嗜好。

二、参考表率

  《GB 4789.30-2016 食物安世界度表率 食物微生物学测验 单核细胞增生李斯特氏菌测验》。

三、测验顺序以及成果

  单核细胞增生李斯特氏菌定性测验顺序见图1。

图1 单核细胞增生李斯特氏菌定性测验顺序

 

  1.分离

  将样品进行梯度稀释后，袭取妥贴的稀释度涂布李斯特氏菌显色平板和PALCAM琼脂平板，于36℃±1℃培养24h～48h。

  单增李斯特氏菌的典型菌落在PALCAM琼脂平板上为小的圆形灰绿色菌落，周围有棕玄色水解圈，有些菌落有玄色凹下。在李斯特氏菌显色平板上为蓝色菌落，菌落周围有一不透明环。如图2所示：

A：PALCAM琼脂平板；B：李斯特氏菌显色平板

图2 单增李斯特氏菌在PALCAM琼脂平板和李斯特氏菌显色平板典型菌落特征

  2.染色镜检

  挑取纯培养的单个可疑菌落，进行革兰氏染色，单增李斯特氏菌为革兰氏阳性菌，镜检为紫色短杆状。如图3所示：

图3 单增李斯特氏菌革兰氏染色镜检成果

  3.能源推行

  挑取纯培养的单个可疑菌落穿刺SIM能源培养基，于25℃～30℃培养48h。单增李斯特氏菌有能源，在SIM培养基上方呈伞状滋长。如图四所示：

图4 单增李斯特氏菌SIM能源推行成果

  4.过氧化酶推行

  挑取纯培养的单个可疑菌落，滴加3%过氧化氢酶试剂后，单增李斯特氏菌菌落在30s内产生宽敞气泡。如图5所示：

图5 单增李斯特氏菌过氧化氢酶推行成果

  5.生化果断

  袭取过氧化氢酶阳性反映的菌落，延续使用海博单增李斯特氏菌的生化果断条进行生化果断，单增李斯特氏菌生化反映成果为木糖阴性、鼠李糖阳性、葡萄糖阳性、麦芽糖阳性、甘雨醇阴性、七叶苷阳性、MR-VP阳性。如图6所示：

图6 单增李斯特氏菌生化果断条推行成果

  详实事项：MR推行需在培养为止后滴加甲基红试剂1滴，立即不雅察成果，出现红色为阳性反映；VP推行需在培养为止后滴加VP试剂（甲液0.3mL，乙液0.1mL），混匀后不雅察成果（4小时内），出现红色为阳性反映。

  6.溶血推行

  将极新的羊血琼脂平板底面差异为20～25个小格，挑取纯培养的单个可疑菌落刺种到血平板上，每格刺种一个菌落，并刺种阳性对照菌（单增李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌）和阴性对照菌（英诺克李斯特氏菌），穿刺时尽量接近底部，但不要触到底面，同期幸免琼脂离散。36℃±1℃培养24h～48h，于亮堂处不雅察。

  单增李斯特氏菌呈现局促、了了、亮堂的溶血圈，英诺克李斯特氏菌无溶血圈，伊氏李斯特氏菌产生宽的、综合了了的β-溶血区域。如图7所示：

A-1、A-2、A-3和A-4均为待测菌落；B：单增李斯特氏菌阳性对照；

C：伊氏李斯特氏菌；D：英诺克李斯特氏菌

图7 单增李斯特氏菌溶血推行成果

  7.协同溶血推行

  在羊血琼脂平板上平行划线接种金黄色葡萄球菌和马红球菌，挑取纯培养的单个可疑菌落垂直划线接种于平行线之间，垂直线两头不要波及平行线，距离1mm～2mm，同期接种单增李斯特氏菌、英诺克李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌，于36±1℃培养24h～48h。

  单增李斯特氏菌在聚首金黄色葡萄球菌处出现约2mm的β-溶血增强区域，伊氏李斯特氏菌在聚首马红球菌处出现约5～10mm的“箭头状”β-溶血增强区域，英诺克李斯特氏菌不产生溶血风景。如图8所示：

A：金黄色葡萄球菌；B：马红球菌；C：单增李斯特氏菌阳性对照

D和G：待测菌；E：英诺克李斯特氏菌；F：伊氏李斯特氏菌

图8 单增李斯特氏菌协同溶血推行成果

三、成果判定

  若待测菌在PALCAM琼脂平板上为小的圆形灰绿色菌落，周围有棕玄色水解圈，有些菌落有玄色凹下；在李斯特氏菌显色平板上为蓝色菌落，菌落周围有一不透明环；镜检成果为革兰氏阳性杆菌；有能源、过氧化酶阳性、木糖阴性、鼠李糖阳性、葡萄糖阳性、麦芽糖阳性、甘雨醇阴性、七叶苷阳性、MR-VP阳性，可初步判断为单增李斯特氏菌。

  注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。

 

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